農(nóng)業(yè)是國(guó)家的基礎(chǔ)。農(nóng)業(yè)當(dāng)中不可避免的就是蟲害的問(wèn)題。接下來(lái)，我們就討論一下ELISA試劑盒檢測(cè)技術(shù)對(duì)抗蟲基因植物的研究。
    眼下應(yīng)用得和zui有潛力的一個(gè)抗蟲基因是Bt殺蟲基因，在農(nóng)業(yè)蟲害的防治過(guò)程中起到非常重要的作用。雖然現(xiàn)在獲得的轉(zhuǎn)Bt抗蟲基因植物已達(dá)近70種，但是新的Bt殺蟲基因仍然不斷的被分離和鑒定，使得轉(zhuǎn)Bt抗蟲基因植物的研究持續(xù)、高速發(fā)展，因此急需找到一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

    此ELISA研究實(shí)驗(yàn)以目前抗蟲轉(zhuǎn)基因育種中研究zui多的Bt CryIA（C）基因的表達(dá)產(chǎn)物為檢測(cè)目標(biāo)，在提取出高純度抗原并制備出高特異性抗體的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)研究了兩種載體上三種ELISA試劑盒測(cè)定方法的檢測(cè)靈敏度，初步建立起快速、準(zhǔn)確的ELISA檢測(cè)技術(shù)。研究結(jié)果如下：

 一．采用多種生化技術(shù)提取蘇云金芽孢桿菌的殺蟲晶體蛋白，制備出了高純度的抗原。首先用堿液（50mM Na_2CO_3，50mM EDTA，3％巰基乙醇）裂解孢晶混合物，調(diào)節(jié)PH至等電點(diǎn)沉淀出晶體殺蟲蛋白，再用聚丙烯酰胺凝膠制備電泳進(jìn)一步純化粗提的殺蟲晶體蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳分析顯示只有一條帶，說(shuō)明獲得的分子量約為130KD的殺蟲晶體蛋白達(dá)到了電泳純，為制備特異性抗體提供了條件保障。
 二．制備出了高特異性的Bt殺蟲蛋白抗體和高質(zhì)量的酶標(biāo)抗體。用純化的Bt殺蟲蛋白作為抗原免疫白兔，獲得了高特異性的抗血清，再經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀和DEAE-52柱層析純化，提取出了較純的IgG。采用改良的過(guò)碘酸鈉法，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記IgG制備出了克分子比為2、工作濃度為1：800的高質(zhì)量酶標(biāo)抗體。為建立高靈敏度的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)。

三．比較了兩種載體上三種ELISA試劑盒檢測(cè)方法的靈敏度，初步建立起檢測(cè)Bt殺蟲蛋白的高靈敏度方法。在聚苯乙烯酶標(biāo)板上的測(cè)定結(jié)果表明：直接ELISA和夾心ELISA的靈敏度相同，都為0.94ng／孔，但直接ELISA檢測(cè)中抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈極顯著，夾心ELISA中抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈顯著；間接ELISA的靈敏度較前兩者低，使用HRP-IgG的靈敏度為15ng／孔，抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈顯著，使用AKP-IgG的靈敏度為3.75ng／孔，抗原濃度與OD值間的線性關(guān)系呈極顯著。在硝酸纖維素膜上的測(cè)定結(jié)果表明：直接Dot—ELISA和夾心Dot-ELISA的靈敏度相同，都為4.06-8.13ng，間接Dot-ELISA的靈敏度較前兩者高，使用HRP-IgG的靈敏度為2.03-4.06ng，使用AKP-IgG的靈敏度為2.03ng。